Xanthine Oxidase Double Nickase Plasmid (h): sc-401185-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Xanthine Oxidase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Xanthine Oxidase Double-Nickase-Plasmid (h) und Xanthine Oxidase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf XDH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Xanthine Oxidase: sc-398548
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Xanthine Oxidase Double Nickase Plasmid (h) | sc-401185-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Xanthine Oxidase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401185-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
XDH kodiert die Xanthinoxidase, eine molybdänhaltige Oxidoreduktase, die die letzten Schritte des Purinabbaus katalysiert, indem sie Hypoxanthin zu Xanthin und Xanthin zu Harnsäure umsetzt. Während dieser Reaktionen kann das Enzym reaktive Sauerstoffspezies erzeugen, wodurch die XDH-Aktivität mit der Redoxhomöostase, oxidativem Stress-Signaling und entzündlichen Reaktionen verknüpft ist. Die Funktion der Xanthinoxidase überschneidet sich mit Signalwegen der metabolischen Anpassung und Prozessen der Gewebeschädigung, bei denen Purinumsatz und Oxidantienbildung erhöht sind. Eine fehlregulierte XDH-Expression oder -Aktivität wurde mit der Biologie der Hyperurikämie, endothelialer Dysfunktion und oxidativen Schäden im Kontext kardiometabolischer und entzündlicher Erkrankungen in Verbindung gebracht, was ihre Nutzung als mechanistisches Ziel in der Stoffwechsel- und Stressantwortforschung unterstützt.
Xanthine Oxidase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des XDH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von XDH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die XDH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit XDH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.