Xanthine Oxidase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401185
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Xanthine Oxidase Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Xanthine Oxidase-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Xanthine Oxidase: sc-398548
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Xanthine Oxidase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401185 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das menschliche XDH-Gen kodiert die Xanthinoxidase, ein molybdänabhängiges Enzym, das die letzten Schritte des Purinabbaus katalysiert, indem es Hypoxanthin zu Xanthin und Xanthin zu Harnsäure umsetzt. Während dieser Reaktionen kann es reaktive Sauerstoffspezies (ROS) erzeugen und verknüpft damit den Purinstoffwechsel mit der Redoxhomöostase und der Signalgebung bei oxidativem Stress. Die Aktivität der Xanthinoxidase beeinflusst die Endothelfunktion, Entzündungsreaktionen und die metabolische Anpassung; eine Dysregulation wurde mit hyperurikämieassoziierter Biologie, Mechanismen der Ischämie‑Reperfusionsschädigung und oxidativen Signalwegen in Verbindung gebracht, die für kardiometabolische Erkrankungen relevant sind. XDH wird außerdem im Kontext des Leberstoffwechsels und der systemischen Stickstoffbilanz untersucht, wobei ein veränderter Purinumsatz zelluläre Stressantworten umgestalten kann.
Das Xanthine Oxidase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des XDH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des XDH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von XDH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Xanthine Oxidase-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von XDH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Xanthine Oxidase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf XDH-Exone abzielen, die für die Xanthine Oxidase-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere XDH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Xanthine Oxidase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Xanthine Oxidase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des XDH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Xanthine Oxidase HDR-Plasmid (h) und Xanthine Oxidase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von XDH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten XDH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.