WWOX Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403070-ACT

WWOX (oxidoredutase contendo domínio WW) codifica uma proteína associada à supressão tumoral, mapeada ao sítio frágil comum FRA16D, e está implicada na manutenção da estabilidade do genoma. O WWOX humano participa de redes de sinalização que integram apoptose, respostas a danos no DNA e vias de estresse celular, mediadas em parte por interações do domínio WW com parceiros ricos em prolina e pela modulação de reguladores transcricionais. A alteração da expressão de WWOX ou sua perda de função tem sido associada à transformação oncogênica e a fenótipos metastáticos em múltiplos contextos teciduais, e a disrupção genética também está relacionada a transtornos do neurodesenvolvimento, incluindo encefalopatia epiléptica. Essas propriedades fazem do WWOX um componente frequentemente estudado em vias que controlam proliferação, diferenciação e morte celular.

WWOX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WWOX sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WWOX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WWOX em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WWOX, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WWOX. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WWOX nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WWOX no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WWOX em células tumorais com expressão de WWOX silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.