WTAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425635

Übersicht

Wtap kodiert WTAP (Wilms-Tumor-1-assoziiertes Protein), eine zentrale regulatorische Komponente des mRNA‑N6‑Methyladenosin-(m6A)-Writer-Komplexes, die die katalytische Aktivität von METTL3/METTL14 unterstützt und die nukleäre Lokalisation der Methylierungsmaschinerie koordiniert. Durch die m6A‑abhängige Kontrolle der prä‑mRNA‑Prozessierung, des alternativen Spleißens, der Transkriptstabilität und der Translation beeinflusst WTAP die Zellzyklusprogression, die Festlegung von Zelllinien (Lineage Specification) und stressresponsive Programme der Genexpression. Die WTAP‑Aktivität ist mit RNA‑Stoffwechselwegen in nukleären Speckles verknüpft und verbindet epitranskriptomische Regulation mit entwicklungsbiologischen Signalwegen und Differenzierungsnetzwerken. Eine dysregulierte, WTAP‑assoziierte m6A‑Ablagerung wurde in Modellsystemen mit veränderten Proliferations‑ und Differenzierungszuständen in Zusammenhang gebracht, die für die Krebsbiologie sowie für hämatopoetische und entwicklungsbezogene Phänotypen relevant sind.

Das WTAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Wtap-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Wtap-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Wtap nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die WTAP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Wtap-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der WTAP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Wtap-Exone abzielen, die für die WTAP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Wtap-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom WTAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom WTAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Wtap-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das WTAP HDR-Plasmid (m) und WTAP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Wtap-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Wtap-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.