WSTF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404237

Übersicht

BAZ1B kodiert den Williams-Syndrom-Transkriptionsfaktor (WSTF), ein chromatinassoziiertes regulatorisches Protein, das als zentrale Untereinheit der Remodeling-Komplexe WICH und B-WICH fungiert. WSTF koordiniert das Nukleosomen-Remodeling mit DNA-Replikation und -Reparatur und trägt durch die Regulation von Replikationsstress-Antworten sowie die Wiederaufnahme gestoppter Replikationsgabeln zur Genomstabilität bei. Darüber hinaus besitzt es eine atypische Tyrosinkinase-Aktivität, die an phosphorylierungsabhängiger Signalübertragung am Chromatin beteiligt ist und dadurch die Transkriptionskontrolle mit DNA-Schadensantwortwegen verknüpft. Eine veränderte BAZ1B-Dosierung und fehlregulierte, WSTF-vermittelte Chromatinprogramme wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie mit krebsrelevanten Transkriptions- und Reparaturdefekten in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in der epigenetischen Regulation und Krankheitsbiologie unterstützt.

Das WSTF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BAZ1B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BAZ1B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BAZ1B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die WSTF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BAZ1B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der WSTF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BAZ1B-Exone abzielen, die für die WSTF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BAZ1B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom WSTF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom WSTF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BAZ1B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das WSTF HDR-Plasmid (h) und WSTF HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BAZ1B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BAZ1B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.