WSTF CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404237-ACT

Humanes **BAZ1B** kodiert den Williams-Syndrom-Transkriptionsfaktor (**WSTF**), ein nukleäres, chromatinassoziiertes Protein, das ATP-abhängiges Chromatin-Remodeling mit der Phosphorylierung von Histon **H2A.X** während der DNA-Schadensantwort verknüpft. WSTF wirkt im **WICH**-Komplex zusammen mit **SMARCA5** und trägt zudem zum Chromatin-Remodeling der **ISWI**-Familie bei, indem es die Nukleosomenpositionierung mit der Transkriptionsregulation und der replikationsassoziierten Chromatin-Aufrechterhaltung verbindet. Über diese Aktivitäten beeinflusst **BAZ1B** die Genomstabilität, den Zellzyklus-Fortschritt und RNA-Polymerase-II-abhängige Genexpressionsprogramme. Eine veränderte **BAZ1B**-Gen-Dosierung und fehlregulierte, WSTF-abhängige Chromatinzustände wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und umfassenderen transkriptionellen Störungen in Verbindung gebracht, die für die Krankheitsbiologie relevant sind.

WSTF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BAZ1B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

WSTF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BAZ1B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BAZ1B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen WSTF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BAZ1B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von WSTF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des WSTF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BAZ1B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.