Wolframin Double Nickase Plasmid (h): sc-403869-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Wolframin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Wolframin Double-Nickase-Plasmid (h) und Wolframin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf WFS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Wolframin Double Nickase Plasmid (h) | sc-403869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Wolframin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WFS1 kodiert Wolframin, ein multipassiges Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums (ER), das zur Aufrechterhaltung der ER-Homöostase beiträgt und Zellen bei sekretorischem und metabolischem Stress vor fehlangepasster Signalübertragung der Unfolded-Protein-Response (UPR) schützt. Wolframin ist an Prozessen beteiligt, die mit der ER-Ca²⁺-Handhabung, der Proteostase sowie dem Crosstalk zwischen ER-Stress-Signalwegen und der mitochondrialen Funktion verknüpft sind, und beeinflusst dadurch das Zellüberleben und die Insulinsekretionskapazität. Eine Fehlregulation von WFS1 ist mit dem Wolfram-Syndrom assoziiert und wurde auch mit weiter gefassten neurodegenerativen sowie diabetesbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was WFS1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung stressresponsiver Signalnetzwerke macht. In humanen Zellmodellen liefert eine Perturbation von WFS1 eine Messgrundlage für ER-Stress-/UPR-Marker, calciumabhängige Signalgebung und nachgelagerte Effekte auf Stoffwechsel und Zellschicksal.
Wolframin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des WFS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von WFS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die WFS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit WFS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.