Wnt-8b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405077-ACT

O WNT8B codifica a glicoproteína secretada Wnt-8b, um ligante da rede de sinalização Wnt que regula a especificação do destino celular, a proliferação e o padrão de formação dos tecidos. A Wnt-8b influencia principalmente os programas transcricionais canônicos de Wnt/β-catenina ao interagir com os co-receptores Frizzled e LRP, com efeitos a jusante na expressão gênica do desenvolvimento e nas trajetórias de diferenciação. Na biologia humana, a atividade de WNT8B está intimamente ligada a processos de neurodesenvolvimento e ao padrão regional no sistema nervoso central, e alterações no tônus da via Wnt são frequentemente estudadas no contexto de sinalização oncogênica e de controle anormal do crescimento. Assim, modular a expressão de WNT8B é relevante para dissecar o “cross-talk” de vias que inclui transcrição mediada por TCF/LEF, estados celulares com características de célula-tronco e desfechos de diferenciação dependentes do contexto.

Wnt-8b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT8B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-8b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT8B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT8B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-8b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT8B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-8b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-8b em células tumorais com expressão de WNT8B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.