Wnt-7a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423721
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Wnt-7a Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Wnt-7a-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Wnt-7a: sc-365665
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Wnt-7a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-423721 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Wnt7a kodiert den sezernierten Liganden Wnt-7a, einen zentralen Regulator der Wnt-Signalübertragung, der sowohl die β-Catenin-abhängige Transkription als auch nicht-kanonische Signalweg-Outputs beeinflusst, welche die Zytoskelettdynamik und die planare Zellpolarität steuern. In Mausgeweben trägt Wnt-7a zur embryonalen Musterbildung und Organogenese bei und hilft, über die Bindung an Frizzled-/LRP-Rezeptoren die Festlegung des Zellschicksals, Proliferation und Migration zu koordinieren. Veränderte Wnt7a-Aktivität wird häufig in Zusammenhängen untersucht, in denen abweichende Entwicklungsprogramme und eine gestörte Gewebehomöostase vorliegen und in denen Stärke („Tone“) des Wnt-Signalwegs sowie Rückkopplungsschleifen Genexpressionszustände prägen. Als Knotenpunkt mit weitreichenden nachgeschalteten Effekten wird Wnt-7a häufig im Hinblick auf seine Rollen in der Morphogenese, im Verhalten von Stamm-/Vorläuferzellen und beim Umbau der Gewebearchitektur erforscht.
Das Wnt-7a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Wnt7a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Wnt7a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Wnt7a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Wnt-7a-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Wnt7a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Wnt-7a-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Wnt7a-Exone abzielen, die für die Wnt-7a-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Wnt7a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Wnt-7a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Wnt-7a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Wnt7a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Wnt-7a HDR-Plasmid (m) und Wnt-7a HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Wnt7a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Wnt7a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.