Wnt-7a CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401188-ACT

WNT7A kodiert das sezernierte Glykoprotein Wnt-7a, einen zentralen Liganden der Wnt-Signalübertragung, der während der Entwicklung und der Homöostase erwachsener Gewebe die Festlegung von Zellschicksalen, Proliferation, Polarität und Migration reguliert. Wnt-7a kann über Frizzled/LRP-Rezeptoren sowohl eine β-Catenin‑abhängige Transkription aktivieren als auch nicht‑kanonische Signalwege anstoßen, die die Organisation des Zytoskeletts und die planare Zellpolarität beeinflussen. In der Humanbiologie ist WNT7A insbesondere für die Gliedmaßenmusterung, epithel‑mesenchymale Interaktionen und die Regulation der Gewebearchitektur relevant; eine Fehlregulation der Wnt-Signalgebung wird allgemein mit angeborenen Fehlbildungen und onkogenen Prozessen in Verbindung gebracht. Die Modulation der WNT7A-Expression ist daher nützlich, um das Zusammenspiel von Signalwegen und kontextabhängige, durch Wnt-Liganden gesteuerte Transkriptionsprogramme zu untersuchen.

Wnt-7a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WNT7A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Wnt-7a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WNT7A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WNT7A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Wnt-7a-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WNT7A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Wnt-7a-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Wnt-7a-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WNT7A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.