Wnt-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423720

Übersicht

Wnt6 codiert Wnt-6, ein sezerniertes Glykoprotein, das als kurzreichweitiger Morphogen in der Wnt-Signalübertragung wirkt und während der Embryogenese sowie der Homöostase im adulten Organismus die Festlegung des Zellschicksals, Proliferation, Polarität und Gewebemusterbildung reguliert. In Mausmodellen kann Wnt-6 Frizzled/LRP-Rezeptorkomplexe aktivieren und dadurch sowohl die kanonische, β‑Catenin‑abhängige Transkription als auch nicht-kanonische Signalwege modulieren, die das Zytoskelett-Remodelling und gerichtete Migration beeinflussen. Eine veränderte Wnt6-Aktivität stört Entwicklungsprogramme und die epithel–mesenchymale Signalübertragung – Prozesse, die häufig in Modellen der Organogenese, Regeneration und Krebsbiologie untersucht werden. Eine fehlregulierte Wnt-Signalgebung wird breit mit angeborenen Fehlbildungen und tumorassoziierten Umbauten von Signalwegen in Verbindung gebracht, wodurch Wnt6 ein relevanter Knotenpunkt für die mechanistische Untersuchung von Signalwegen ist.

Das Wnt-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Wnt6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Wnt6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Wnt6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Wnt-6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Wnt6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Wnt-6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Wnt6-Exone abzielen, die für die Wnt-6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Wnt6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Wnt-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Wnt-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Wnt6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Wnt-6 HDR-Plasmid (m) und Wnt-6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Wnt6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Wnt6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.