Wnt-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401936

Übersicht

WNT3 kodiert das sezernierte Glykoprotein Wnt-3, einen kanonischen Wnt-Liganden, der Frizzled/LRP-Rezeptoren aktiviert, um β‑Catenin zu stabilisieren und die TCF/LEF-abhängige Transkription zu modulieren. Dieses Signal steuert die embryonale Musterbildung, die Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen sowie die Regulation von Proliferations- und Differenzierungsprogrammen in zahlreichen Geweben. Eine abweichende WNT3/Wnt-3-Aktivität stört den Output des Wnt/β‑Catenin-Netzwerks und überschneidet sich mit Signalwegen, die epithelial-mesenchymale Dynamiken, Zellschicksalsfestlegung und Gewebehomöostase regulieren. Eine Fehlregulation der Wnt-3-assoziierten Signalübertragung wurde mit Entwicklungsanomalien und krankheitsrelevanten Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, was WNT3 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Signalwegstudien macht.

Das Wnt-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WNT3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WNT3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WNT3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Wnt-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WNT3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Wnt-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WNT3-Exone abzielen, die für die Wnt-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WNT3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Wnt-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Wnt-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WNT3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Wnt-3 HDR-Plasmid (h) und Wnt-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WNT3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WNT3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.