Wnt-15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406368

Übersicht

WNT9B kodiert das sekretierte Glykoprotein Wnt-15, einen Liganden, der die Wnt-Signalübertragung aktiviert und während der Entwicklung die Festlegung von Zellschicksalen, Proliferation, Polarität und Gewebemusterung reguliert. Durch Interaktionen mit Frizzled-Rezeptoren und Korezeptoren kann Wnt-15 sowohl β‑Catenin‑abhängige Transkriptionsprogramme als auch nicht‑kanonische Signalwege beeinflussen, die die Zytoskelettdynamik und die gerichtete Migration steuern. Die Aktivität von WNT9B ist an Morphogengradienten beteiligt, die die Organogenese formen; eine Fehlregulation der Wnt-Signalgebung wird allgemein mit angeborenen Anomalien und onkogenen Prozessen in Verbindung gebracht. In humanen Zellmodellen bietet WNT9B einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um das Zusammenspiel (Cross-Talk) mit Wachstumsfaktorsignalwegen und den transkriptionellen Netzwerken zu untersuchen, die die Differenzierung steuern.

Das Wnt-15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WNT9B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WNT9B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WNT9B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Wnt-15-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WNT9B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Wnt-15-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WNT9B-Exone abzielen, die für die Wnt-15-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WNT9B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Wnt-15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Wnt-15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WNT9B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Wnt-15 HDR-Plasmid (h) und Wnt-15 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WNT9B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WNT9B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.