Wnt-11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402655-ACT

Humanes WNT11 kodiert das sekretierte Glykoprotein Wnt-11, einen nicht-kanonischen Wnt-Liganden, der vor allem über die Signalwege der planaren Zellpolarität und Wnt/Ca2+ signalisiert, um Zellpolarität, gerichtete Migration und Gewebemorphogenese zu koordinieren. Wnt-11 moduliert die Zytoskelettdynamik und Adhäsionsprogramme über nachgeschaltete Effektoren wie Rho-Familien-GTPasen und JNK und kann kontextabhängig mit der β-Catenin-abhängigen Transkription interagieren. Während der Entwicklung und in adulten Geweben trägt WNT11 zur Organogenese sowie zur Aufrechterhaltung epithelialer und mesenchymaler Zustände bei. Eine fehlregulierte WNT11-Signalgebung wird mit veränderten Migrationsphänotypen und Umbauprogrammen in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz als mechanistischen Knotenpunkt in Signalweg- und Phänotypstudien unterstützt.

Wnt-11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WNT11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Wnt-11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WNT11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WNT11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Wnt-11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WNT11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Wnt-11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Wnt-11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WNT11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.