Plasmide CRISPR d'Activation (h) Wnt-11: sc-402655-ACT

Le gène humain **WNT11** code la glycoprotéine sécrétée **Wnt-11**, un ligand Wnt non canonique qui transmet principalement ses signaux via les voies de la **polarité planaire** et **Wnt/Ca2+**, afin de coordonner la polarité cellulaire, la migration directionnelle et la morphogenèse tissulaire. Wnt-11 module la dynamique du cytosquelette et les programmes d’adhérence via des effecteurs en aval tels que les GTPases de la famille Rho et JNK, et peut, selon le contexte, interagir avec la transcription dépendante de la β-caténine. Au cours du développement et dans les tissus adultes, **WNT11** contribue à l’organogenèse ainsi qu’au maintien des états épithélial et mésenchymateux. Une dérégulation de la signalisation **WNT11** a été associée à des phénotypes migratoires altérés et à des programmes de remodelage observés dans plusieurs contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études de voies de signalisation et de phénotypes.

Wnt-11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNT11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wnt-11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNT11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNT11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wnt-11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNT11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wnt-11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wnt-11 dans les cellules tumorales présentant une expression de WNT11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.