Wnt-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400982

Übersicht

WNT1 kodiert Wnt-1, ein sezerniertes Glykoprotein, das als Morphogen und als Ligand für Frizzled/LRP-Rezeptoren fungiert und dadurch die kanonische Wnt/β-Catenin-Signalübertragung aktiviert. Über die Regulation der β-Catenin-Stabilisierung und der TCF/LEF-abhängigen Transkription beeinflusst Wnt-1 während der Entwicklung und der Gewebehomöostase die Festlegung von Zellschicksalen, die Proliferation und die Differenzierung. Die WNT1-Aktivität ist mit Signalwegen verknüpft, die die epitheliale Organisation und Programme von Vorläuferzellen steuern; eine Fehlregulation der Wnt-Signalgebung ist breit mit onkogener Transformation und gestörter Wachstumskontrolle assoziiert. Varianten in WNT1 wurden zudem mit der Skelettbiologie und Phänotypen der Knochenbildung in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für entwicklungsbiologische und regenerative Forschung unterstreicht.

Das Wnt-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WNT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WNT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WNT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Wnt-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WNT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Wnt-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WNT1-Exone abzielen, die für die Wnt-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WNT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Wnt-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Wnt-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WNT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Wnt-1 HDR-Plasmid (h) und Wnt-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WNT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WNT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.