WISP-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-423705-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das WISP-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- WISP-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und WISP-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Wisp1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
WISP-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423705-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WISP-1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423705-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Wisp1 (WISP-1; CCN4) kodiert ein sezerniertes, matrixassoziiertes Protein, das Signale aus der extrazellulären Matrix mit Wachstumsfaktor-Signalwegen verknüpft und so Zelladhäsion, Migration und Proliferation in Mausgeweben reguliert. WISP-1 wird häufig mit der Wnt/β-Catenin-Signalkaskade in Verbindung gebracht und interagiert mit integrinvermittelten Signalwegen, die während der Entwicklung sowie bei Gewebeumbauprozessen die Umgestaltung des Zytoskeletts, Überlebensprogramme und transkriptionelle Antworten beeinflussen. Eine veränderte WISP-1-Expression wurde in krankheitsrelevanten Modellen mit fehlregulierten fibrotischen Reaktionen, abnormaler angiogener und inflammatorischer Signalgebung sowie dem Umbau des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen WISP-1 zu einem nützlichen Ziel, um das Zusammenspiel zwischen ECM und Signaltransduktion in der Stromabiologie und bei krankheitsrelevanten Umbauprozessen zu untersuchen.
WISP-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Wisp1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Wisp1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Wisp1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Wisp1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.