Wig-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406638-ACT

ZMAT3 (Wig-1) é uma proteína de ligação a RNA com dedos de zinco induzível por p53 que regula a expressão gênica pós-transcricional ao se ligar a elementos ricos em AU e estabilizar ou modular a tradução de mRNAs selecionados. Ao controlar o turnover de RNA e transcritos responsivos ao estresse, a Wig-1 influencia a progressão do ciclo celular, a apoptose e programas de vigilância de RNA que moldam as respostas celulares a danos no DNA e ao estresse oncogênico. A desregulação da atividade de ZMAT3 tem sido associada a alterações na saída funcional da rede de p53 e a mudanças em assinaturas de expressão gênica associadas a tumores, tornando-a relevante para estudos mecanísticos em biologia do câncer e sinalização de estresse. Suas funções de ligação a RNA também sustentam a investigação de vias de estabilidade de mRNA e da regulação dependente do contexto de transcritos pró- e antiapoptóticos.

Wig-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZMAT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wig-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZMAT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZMAT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wig-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZMAT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wig-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wig-1 em células tumorais com expressão de ZMAT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.