WDR82 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406963-ACT

WDR82（WD repeat domain 82）は、WD40リピートを含むタンパク質をコードしており、転写とRNAプロセシングを結び付けるクロマチン関連の制御因子として機能します。WDR82は、転写開始点近傍（プロモーター近傍）における遺伝子発現制御や、転写産物を規定する核内タンパク質複合体との相互作用を介したヒストン修飾状態の協調に関与することが示唆されています。これらの役割を通じて、WDR82は細胞周期の進行、ゲノム安定性、ストレス応答性の転写プログラムを制御する経路に影響を与え得ます。WDR82の発現異常や機能変化は、複数のがん研究および発生生物学の文脈で報告されており、エピジェネティック制御と転写制御の作用機序研究における標的として有用であることを支持しています。

WDR82 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WDR82の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WDR82 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における WDR82 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWDR82転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WDR82の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWDR82遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWDR82依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWDR82発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWDR82経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。