WDR62 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410410-ACT

WDR62 kodiert ein WD-Repeat-haltiges Scaffold-Protein, das an Zentrosomen und Spindelpolen lokalisiert und die Organisation der Mikrotubuli sowie den Ablauf der Mitose koordiniert. Es wird breit mit der Regulation des Zellzyklus, der Proliferation neuronaler Vorläuferzellen und stressaktivierter Signalübertragung in Verbindung gebracht; zudem wurden Interaktionen innerhalb mitotischer Kinase-Netzwerke und JNK-assoziierter Signalwege beschrieben. In der menschlichen Biologie wurde WDR62 mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und einer veränderten neuronalen Differenzierung verknüpft, was zu Funktionen bei symmetrischen/asymmetrischen Teilungen und der Kortexentwicklung passt. Aufgrund seiner Vernetzung in Signalwegen ist es ein nützliches Ziel, um Mechanismen der Genomstabilität, der Zentrosomenfunktion und der proliferativen Kontrolle in krankheitsrelevanten Zellmodellen zu untersuchen.

WDR62 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WDR62-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

WDR62 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WDR62-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WDR62-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen WDR62-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WDR62-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von WDR62-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des WDR62-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WDR62-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.