Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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WDR5 Double Nickase Plasmid (h): sc-402425-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das WDR5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- WDR5 Double-Nickase-Plasmid (h) und WDR5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf WDR5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: WDR5: sc-393080
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
WDR5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402425-NIC | 20 µg | $410.00 |
WDR5 (WD-Repeat-Domäne 5) kodiert ein zentrales, chromatinassoziiertes Gerüstprotein, das an Histon H3 bindet und die Assemblierung der für die H3K4-Methylierung an aktiven Promotoren verantwortlichen COMPASS/MLL-Komplexe koordiniert. Über diese Interaktionen reguliert WDR5 Transkriptionsprogramme, die den Zellzyklusfortschritt, die Linienfestlegung und die Aufrechterhaltung stammzellähnlicher Zustände steuern, und ist zudem an der Transkriptionselongation durch die RNA-Polymerase II sowie an Enhancer-Funktionen beteiligt. WDR5 ist Teil eines epigenetischen Crosstalks mit MYC-abhängiger Genexpression und anderen Chromatinregulatoren, die die globale Chromatinzugänglichkeit prägen. Eine Fehlregulation des WDR5-gekoppelten Chromatin-Remodelings und der H3K4-Methylierung wurde in mehreren Krankheitskontexten mit veränderter entwicklungsbezogener Genexpression und onkogenen Transkriptionsschaltkreisen in Verbindung gebracht.
WDR5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des WDR5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von WDR5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die WDR5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit WDR5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.