WDR18 Plasmide Double Nickase (m): sc-432062-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- WDR18 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il WDR18 Double Nickase Plasmid (m) e il WDR18 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Wdr18. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WDR18 Plasmide Double Nickase (m) | sc-432062-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WDR18 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-432062-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Wdr18 codifica la WD repeat domain 18 (WDR18), una proteina conservata contenente ripetizioni WD40 che funziona come componente centrale del processoma della piccola subunità (SSU), necessario per la maturazione dell’rRNA 18S e la biogenesi del ribosoma 40S. Supportando il processamento del pre-rRNA e l’assemblaggio di complessi ribonucleoproteici nel nucleolo, WDR18 contribuisce a mantenere la capacità di traduzione e la proteostasi durante la crescita e la proliferazione cellulare. L’alterazione dei fattori del processoma SSU è ampiamente associata a stress nucleolare e a un controllo del ciclo cellulare modificato, rendendo Wdr18 un bersaglio rilevante per studiare come la biogenesi ribosomiale si interfacci con la segnalazione dello stress e con i programmi di sviluppo. Nei modelli murini, perturbare Wdr18 offre uno strumento per indagare i meccanismi che collegano difetti nel processamento dell’rRNA a fenotipi che ricordano disfunzioni cellulari di tipo ribosomopatico.
WDR18 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Wdr18 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Wdr18. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Wdr18. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Wdr18 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.