Plasmide Double Nickase (m) WDR18: sc-432062-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) WDR18 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide WDR18 Double Nickase (m) et le plasmide WDR18 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Wdr18. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) WDR18 | sc-432062-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) WDR18 | sc-432062-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Wdr18 code pour le domaine à répétitions WD 18 (WDR18), une protéine WD40 conservée qui constitue un composant central du processome de la petite sous-unité (SSU), nécessaire à la maturation de l’ARNr 18S et à la biogenèse du ribosome 40S. En soutenant le processing du pré-ARNr et l’assemblage de complexes ribonucléoprotéiques dans le nucléole, WDR18 contribue au maintien de la capacité de traduction et de la protéostasie durant la croissance et la prolifération cellulaires. La perturbation des facteurs du processome SSU est largement associée au stress nucléolaire et à une modification du contrôle du cycle cellulaire, ce qui fait de Wdr18 une cible pertinente pour étudier l’interface entre la biogenèse des ribosomes, la signalisation du stress et les programmes de développement. Dans les systèmes murins, la perturbation de Wdr18 permet d’explorer les mécanismes reliant des défauts de maturation de l’ARNr à des phénotypes évoquant une dysfonction cellulaire de type ribosomopathie.
WDR18 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Wdr18 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Wdr18. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Wdr18. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Wdr18.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.