Plásmido CRISPR de Activación (h) WBSCR16: sc-413429-ACT

RCC1L (WBSCR16) codifica una proteína mitocondrial tipo RCC1 implicada en la coordinación de la biogénesis del ribosoma mitocondrial y en el mantenimiento de la capacidad de fosforilación oxidativa. A través de sus efectos sobre el ensamblaje del mitorribosoma y el metabolismo del ARN mitocondrial, WBSCR16 ayuda a preservar la proteostasis mitocondrial y el funcionamiento eficiente de la cadena de transporte de electrones. La alteración de esta vía puede modificar la homeostasis energética celular, las respuestas al estrés mitocondrial y las señales posteriores vinculadas a la adaptación metabólica. WBSCR16 se ha estudiado en el contexto de fenotipos de disfunción mitocondrial y es relevante para la investigación mecanística de trastornos que implican una traducción y respiración mitocondriales deterioradas.

WBSCR16 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RCC1L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

WBSCR16 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RCC1L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RCC1L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de WBSCR16. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RCC1L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de WBSCR16 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía WBSCR16 en células tumorales con expresión de RCC1L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.