VRL-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423688

Descripción general

Trpv2 codifica el canal murino VRL-1 (TRPV2), un canal catiónico no selectivo de la familia de receptores potenciales transitorios vaniloides que contribuye a la entrada de Ca²⁺ inducida por estímulos. VRL-1 participa en procesos celulares que incluyen la mecanosensación y las respuestas al estrés osmótico o térmico, y puede modular la señalización posterior dependiente de calcio, con impacto en la excitabilidad de la membrana, la dinámica del citoesqueleto y los programas de transcripción. En linajes inmunitarios y mieloides, la actividad de TRPV2 se ha relacionado con la fagocitosis y la señalización inflamatoria, mientras que en tejidos excitables se estudia en el contexto de la transducción sensorial. Las alteraciones en la función o la expresión de TRPV2 se han investigado en modelos de dolor neuropático, trastornos inflamatorios, miocardiopatía y migración celular asociada al cáncer, lo que respalda su relevancia como diana mecanística en diversas vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VRL-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trpv2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trpv2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trpv2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VRL-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trpv2 para la investigación de la señalización de VRL-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Trpv2 críticos para la función de VRL-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trpv2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VRL-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VRL-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trpv2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VRL-1 (m) y el plásmido HDR VRL-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trpv2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trpv2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.