Plasmide Double Nickase (h) VPS35: sc-402019-NIC

VPS35 code un composant central du complexe rétromère de sélection des cargos, qui orchestre le transport de retour des endosomes vers l’appareil de Golgi ainsi que le recyclage endosomal des protéines transmembranaires. En s’associant aux sortines nexines et au remodelage de l’actine dépendant de WASH, VPS35 contribue à réguler le trafic des récepteurs, l’homéostasie lysosomale et l’équilibre entre les voies de recyclage et de dégradation. Une altération de la fonction de VPS35 perturbe la dynamique endolysosomale et la protéostasie, modifiant la composition en protéines membranaires à la surface cellulaire et au sein de la voie sécrétoire. Des études génétiques et fonctionnelles ont relié une activité de VPS35 modifiée à des mécanismes neurodégénératifs, en particulier des voies convergeant vers le maintien synaptique, le contrôle qualité mitochondrial et la susceptibilité à l’agrégation protéique.

VPS35 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VPS35 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VPS35. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VPS35. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VPS35.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.