VPAC2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402062-ACT

ヒトVIPR2は、血管作動性腸管ペプチド（VIP）および下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（PACAP）のクラスB Gタンパク質共役受容体であるVPAC2受容体をコードしています。VPAC2は主としてGsに共役し、cAMPを上昇させてPKA依存性の転写プログラムを活性化します。また、細胞種や状態などの文脈に応じて、MAPK/ERKシグナル伝達やカルシウム動態にも追加の影響を及ぼします。この受容体は、サイトカインシグナルと神経ペプチドに対する細胞応答性を調整することで、神経内分泌のコミュニケーション、概日リズムおよび代謝の制御、ならびに免疫細胞の活動を調節します。VIPR2/VPAC2シグナルの破綻やコピー数変異は神経精神・発達関連の表現型と関連づけられており、経路活性の変化は炎症性疾患や代謝疾患の病態生物学においても研究されています。

VPAC2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VIPR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VPAC2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VIPR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVIPR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VPAC2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVIPR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVPAC2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVIPR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVPAC2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。