von Willebrand Factor/VWF Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400217-LAC

VWF codifica o fator de von Willebrand, uma grande glicoproteína multimérica produzida principalmente por células endoteliais e megacariócitos, que medeia a adesão plaquetária ao colágeno subendotelial exposto e estabiliza o fator VIII da coagulação circulante. É armazenado nos corpos de Weibel–Palade e nos grânulos α das plaquetas e é liberado em resposta à lesão vascular, integrando o tráfego secretório endotelial, a mecanotransdução dependente de cisalhamento e a hemostasia primária. A montagem dos multímeros de VWF e o processamento proteolítico pela ADAMTS13 regulam a formação de trombos e a patência microvascular sob fluxo de alto cisalhamento. Alterações na abundância do VWF ou na distribuição de seus multímeros estão associadas à doença de von Willebrand e a outros fenótipos hemorrágicos ou trombóticos, tornando-o um nó central para estudos de biologia vascular e vias de coagulação.

As Partículas de Ativação Lentivirais von Willebrand Factor/VWF (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de VWF numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais von Willebrand Factor/VWF (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição VWF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de von Willebrand Factor/VWF. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo VWF e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.