Von Hippel Lindau/VHL Lentiviral Activation Particles (h): sc-400528-LAC

VHL kodiert den von-Hippel–Lindau-Tumorsuppressor, die Substraterkennungskomponente des CRL2^VHL‑E3‑Ubiquitin‑Ligasekomplexes, der HIF‑1α und HIF‑2α einer sauerstoffabhängigen Ubiquitinierung und dem proteasomalen Abbau zuführt. Über die Regulation der Hypoxiesignalkaskade beeinflusst VHL Angiogenese, Erythropoese, metabolische Umprogrammierung, Umbau der extrazellulären Matrix und die Zellzykluskontrolle und verknüpft damit die Sauerstoffsensorik mit transkriptionellen und proteostatischen Netzwerken. Der Verlust oder eine Funktionsstörung von VHL ist stark mit einer fehlregulierten HIF‑Aktivität und einer veränderten zellulären Anpassung an Hypoxie assoziiert, was sowohl für die hereditäre VHL‑Erkrankung als auch für multiple Tumorkontexte relevant ist.

Von Hippel Lindau/VHL Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente VHL-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Von Hippel Lindau/VHL Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der VHL-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Von Hippel Lindau/VHL-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen VHL-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.