VMAT 2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401308-LAC

SLC18A2 codifica il trasportatore vescicolare delle monoamine 2 (VMAT2), una proteina integrale della membrana delle vescicole sinaptiche che sfrutta il gradiente elettrochimico dei protoni per caricare dopamina, serotonina, noradrenalina, adrenalina e istamina nelle vescicole secretorie. Regolando la sequestrazione vescicolare e il rilascio quantale, VMAT2 controlla la neurotrasmissione monoaminergica e protegge le cellule dall’ossidazione delle monoamine nel citosol, collegandosi così al traffico vescicolare, al metabolismo dei neurotrasmettitori e alle vie dello stress ossidativo. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SLC18A2 sono state associate alla vulnerabilità dei neuroni dopaminergici e a fenotipi neuropsichiatrici, rendendolo rilevante per studi sui meccanismi del morbo di Parkinson, sulla regolazione dell’umore e sulla biologia dell’uso di sostanze. VMAT2 umano è inoltre utilizzato come marcatore e nodo funzionale in modelli di differenziamento catecolaminergico e serotoninergico e della dinamica delle vescicole sinaptiche.

Le particelle di attivazione lentivirale VMAT 2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SLC18A2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale VMAT 2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SLC18A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di VMAT 2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SLC18A2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.