Plásmido CRISPR de Activación (m) Vitamin D Receptor/VDR: sc-423664-ACT

El gen **Vdr** del ratón codifica el receptor de vitamina D (VDR), un receptor nuclear activado por ligando que forma heterodímeros con RXR para unirse a elementos de respuesta a la vitamina D y regular programas transcripcionales que controlan la homeostasis del calcio y del fosfato, la diferenciación epitelial y la modulación inmunitaria. VDR integra señales de la señalización de hormonas esteroideas con el remodelado de la cromatina para influir en el control del ciclo celular, la función de barrera y la expresión de genes inflamatorios en múltiples tejidos. En investigación biomédica, la alteración de la actividad de **Vdr** se estudia comúnmente en contextos de metabolismo óseo y mineral, fisiología intestinal e inflamación mediada por el sistema inmunitario, donde los cambios en la transcripción dependiente de VDR pueden reconfigurar redes de citocinas y vías metabólicas. Estas funciones convierten a **Vdr** en un nodo central para analizar la regulación transcripcional y el “crosstalk” (interacción) entre vías de señalización en fenotipos relevantes para el desarrollo y la enfermedad en modelos murinos y en células cultivadas.

Vitamin D Receptor/VDR El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Vdr sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Vitamin D Receptor/VDR El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Vdr en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Vdr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Vitamin D Receptor/VDR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Vdr y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Vitamin D Receptor/VDR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Vitamin D Receptor/VDR en células tumorales con expresión de Vdr silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.