VILL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423675

Übersicht

Vill kodiert Villin-like (VILL), ein aktinbindendes Zytoskelettprotein, das in epithelialen Kontexten angereichert ist und dort zur Organisation und zum Umbau von F‑Aktin-Netzwerken beiträgt. Proteine der Villin/Gelsolin-Superfamilie regulieren das Durchtrennen, Bündeln und Stabilisieren von Aktinfilamenten und verknüpfen Calcium- und Phosphoinositid-Signale mit Veränderungen der Zellform, Polarität und barriereassoziierten Architektur. Über diese Funktionen ist VILL für Signalwege relevant, die die epitheliale Differenzierung, die Organisation von Mikrovilli und das dynamische Remodelling von Zell-Zell-Kontakten steuern und damit die Gewebehomöostase beeinflussen. Fehlregulierte Aktindynamik und eine beeinträchtigte epitheliale Strukturintegrität sind allgemein an Entzündung, Barrierefunktionsstörungen und tumorassoziiertem Remodelling beteiligt, was Vill zu einem nützlichen Lokus für mechanistische Studien zur Kontrolle des Zytoskeletts macht.

Das VILL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vill-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vill-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vill nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VILL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vill-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VILL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vill-Exone abzielen, die für die VILL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vill-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VILL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VILL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vill-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VILL HDR-Plasmid (m) und VILL HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vill-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vill-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.