VEZF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423670

Übersicht

Vezf1 kodiert VEZF1, einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der besonders in vaskulären Endothel- und hämatopoetischen Kontexten angereichert ist und Genexpressionsprogramme reguliert, die für die embryonale Angiogenese und die Musterbildung des Gefäßsystems erforderlich sind. VEZF1 wirkt bei der Kontrolle der endothelialen Differenzierung, des Gefäßaussprossens und der Aufrechterhaltung der vaskulären Integrität, indem es transkriptionelle Netzwerke koordiniert, die mit Zellmigration, Umbau der extrazellulären Matrix und entwicklungsspezifischen Signalwegen verknüpft sind. Eine veränderte Vezf1-Aktivität wurde in Mausmodellen mit Defekten der Blutgefäßbildung und letaler Entwicklungsstörung in Verbindung gebracht, und seine regulatorischen Funktionen machen es relevant für die Untersuchung vaskulärer Malformationen und einer beeinträchtigten Gewebevaskularisierung. Als nukleares DNA-bindendes Protein stellt VEZF1 zudem einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um die transkriptionelle Kontrolle der Spezifikation der endothelialen Zelllinie zu analysieren.

Das VEZF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vezf1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vezf1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vezf1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VEZF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vezf1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VEZF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vezf1-Exone abzielen, die für die VEZF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vezf1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VEZF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VEZF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vezf1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VEZF1 HDR-Plasmid (m) und VEZF1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vezf1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vezf1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.