versican CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401173-ACT

VCAN は、細胞外マトリックスに存在する大型のコンドロイチン硫酸プロテオグリカンであるバーシカン（versican）をコードしており、ヒアルロン酸、リンクタンパク質、増殖因子との相互作用を介して、組織構築、保水性、および細胞周囲（ペリセルラー）シグナル伝達を調節します。バーシカンは、インテグリン媒介性の刺激や細胞外マトリックスのリモデリング・プログラムを形作ることで、細胞接着、遊走、増殖に影響を及ぼし、炎症性シグナルや間質—上皮間クロストークに対しては状況依存的な作用を示します。VCAN の発現量やアイソフォームのバランスの変化は、線維化、血管リモデリング、腫瘍関連間質と関連づけられており、これらの場では細胞外マトリックス組成が浸潤能や免疫細胞のトラフィッキングを制御し得ます。こうした特徴により、VCAN は発生、創傷修復、疾患関連微小環境における、マトリックス駆動性の細胞挙動制御を研究する上で有用な標的となります。

versican CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VCANの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

versican CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VCAN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVCAN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性versicanの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVCAN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるversican依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVCAN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるversican経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。