Plasmide CRISPR d'Activation (h) versican: sc-401173-ACT

VCAN code la versicane, un grand protéoglycane de la matrice extracellulaire à sulfate de chondroïtine qui module l’architecture tissulaire, l’hydratation et la signalisation péricellulaire via des interactions avec l’acide hyaluronique, des protéines de liaison et des facteurs de croissance. La versicane influence l’adhérence, la migration et la prolifération cellulaires en façonnant les signaux médiés par les intégrines et les programmes de remodelage de la matrice extracellulaire, avec des effets dépendants du contexte sur la signalisation inflammatoire et le dialogue stroma–épithélium. Une expression altérée de VCAN et un déséquilibre entre ses isoformes ont été associés à la fibrose, au remodelage vasculaire et au stroma associé aux tumeurs, où la composition de la matrice extracellulaire peut réguler l’invasion et le trafic des cellules immunitaires. Ces caractéristiques font de VCAN une cible utile pour étudier la régulation, par la matrice, du comportement cellulaire au cours du développement, de la réparation des plaies et dans des microenvironnements pertinents pour les maladies.

versican Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VCAN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

versican Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VCAN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VCAN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de versican. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VCAN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de versican au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie versican dans les cellules tumorales présentant une expression de VCAN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.