Veli3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423669

Übersicht

Lin7c kodiert Veli3, ein Mitglied der LIN7-Familie von Gerüstproteinen mit PDZ-Domäne, die Membran-Mikrodomänen organisieren und transmembrane Rezeptoren mit zytosolischen Signalkomplexen koppeln. In Mauszellen trägt Veli3 zur Assemblierung von Netzwerken aus Polaritäts- und Junction-Proteinen bei und beeinflusst dadurch den basolateralen Transport, die Rezeptorlokalisation und die Organisation des Zytoskeletts. Über Interaktionen mit MAGUK-Proteinen und Polaritätsregulatoren können LIN7C-assoziierte Komplexe Signalwege modulieren, die die Integrität von Epithelien, die neuronale Konnektivität und den vesikelvermittelten Transport steuern. Eine Fehlregulation der Zellpolarität und des Junction-Gerüsts wird mit abweichender Gewebearchitektur und veränderter Signaltransduktion in Verbindung gebracht, wodurch Lin7c ein nützliches Ziel für die Untersuchung von Mechanismen ist, die für Entwicklungsdefekte und krankheitsassoziierte Umbauprozesse der zellulären Organisation relevant sind.

Das Veli3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lin7c-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lin7c-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lin7c nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Veli3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lin7c-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Veli3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lin7c-Exone abzielen, die für die Veli3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lin7c-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Veli3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Veli3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lin7c-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Veli3 HDR-Plasmid (m) und Veli3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lin7c-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lin7c-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.