Veli2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423668

Übersicht

Lin7b kodiert Veli2, ein membranassoziiertes Gerüstprotein (Scaffold) aus der MAGUK/LIN7-Familie, das zur Organisation basolateraler Polaritätskomplexe beiträgt und den Transport von Membranproteinen stabilisiert. Veli2 ist an der Assemblierung von Protein-Netzwerken an Zellkontakten und Synapsen beteiligt, indem es mit Partnern interagiert, die PDZ-Domänen enthalten, und beeinflusst dadurch die Epithelpolarität, neuronale Signalübertragung und den vesikulären Transport. In Mausmodellen kann eine Störung LIN7-assoziierter Komplexe die Zell-Zell-Adhäsion, die Lokalisation von Rezeptoren und die Organisation exzitatorischer Synapsen beeinträchtigen – Prozesse, die häufig in Modellen zur Neuroentwicklung und Barrierefunktion untersucht werden. Veränderte Polaritäts- und Trafficking-Wege sind breit relevant für Mechanismen, die Entwicklungsphänotypen und krankheitsassoziierte Fehlregulationen der Gewebearchitektur und neuronalen Konnektivität zugrunde liegen.

Das Veli2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lin7b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lin7b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lin7b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Veli2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lin7b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Veli2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lin7b-Exone abzielen, die für die Veli2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lin7b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Veli2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Veli2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lin7b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Veli2 HDR-Plasmid (m) und Veli2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lin7b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lin7b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.