Plasmide CRISPR d'Activation (h) VEGF-D: sc-401669-ACT

Le gène humain **VEGFD** code le **VEGF-D**, un facteur de croissance sécrété qui signale principalement via **VEGFR-3** et qui, après maturation par clivage protéolytique, peut aussi activer **VEGFR-2** afin de favoriser la prolifération, la migration et la survie des cellules endothéliales lymphatiques et vasculaires. Le VEGF-D contribue à la lymphangiogenèse, au remodelage vasculaire et à des interactions de signalisation liées à la matrice extracellulaire, en crosstalk avec les voies **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** et celles de la famille **SRC**. Son expression est régulée par des signaux du développement et de l’inflammation, et il est souvent étudié dans le contexte de la différenciation endothéliale, de l’homéostasie des fluides tissulaires et du trafic des cellules immunitaires. Une activité dérégulée du VEGF-D a été associée à un remodelage lymphatique pathologique et à des modifications vasculaires/lymphatiques liées aux tumeurs, ce qui soutient sa pertinence dans des modèles mécanistiques de la biologie du cancer et des maladies inflammatoires.

VEGF-D Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VEGFD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VEGF-D Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VEGFD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VEGFD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VEGF-D. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VEGFD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VEGF-D au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VEGF-D dans les cellules tumorales présentant une expression de VEGFD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.