Plasmide CRISPR d'Activation (m) VEGF: sc-423665-ACT

Le gène murin *Vegfa* code le facteur de croissance de l’endothélium vasculaire (VEGF), une cytokine sécrétée qui régule la prolifération, la migration et la survie des cellules endothéliales afin de coordonner l’angiogenèse et la perméabilité vasculaire. La signalisation du VEGF sollicite principalement VEGFR2 pour activer les cascades PI3K–AKT, MAPK/ERK et PLCγ–PKC, intégrant les signaux d’hypoxie et les indices métaboliques au remodelage tissulaire. Une expression dérégulée du VEGF est associée à une néovascularisation pathologique, à des modifications de la perfusion et à des changements du microenvironnement inflammatoire qui influencent la biologie tumorale, la réparation des plaies ainsi que des modèles de maladies rétiniennes et cardiovasculaires. En tant que nœud central du dialogue entre compartiments vasculaire et stromal, *Vegfa* est largement utilisé pour étudier la signalisation endothélio‑parenchymateuse et le remodelage de la matrice extracellulaire.

VEGF Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Vegfa sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VEGF Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Vegfa dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Vegfa, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VEGF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Vegfa natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VEGF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VEGF dans les cellules tumorales présentant une expression de Vegfa silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.