VEGF-C CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423667-ACT

Das murine Gen **Vegfc** kodiert den vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor C (VEGF‑C), einen sezernierten Liganden, der vor allem über **VEGFR‑3/FLT4** signalisiert, um die **Lymphangiogenese** und das **Remodeling lymphatischer Gefäße** zu regulieren, und in bestimmten Kontexten zusätzlich angiogene Programme beeinflusst. VEGF‑C wirkt auf Proliferation, Migration und Überleben von Endothelzellen und integriert dabei nachgeschaltete **MAPK/ERK**- und **PI3K/AKT**-Signalwege, die die Ausbildung vaskulärer Netzwerke und die Gefäßpermeabilität mitgestalten. In immunologischen und stromalen Mikroumgebungen können VEGF‑C‑getriebene Veränderungen des Lymphsystems das Gleichgewicht der interstitiellen Flüssigkeit sowie den Transport von Immunzellen über lymphatische Leitbahnen modulieren. Eine Fehlregulation der VEGF‑C/VEGFR‑3‑Signalgebung wird mit pathologischem lymphatischem Remodeling in Verbindung gebracht und wird häufig in Modellen für Entzündung, Gewebefibrose und tumorassoziierte Lymphangiogenese untersucht.

VEGF-C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Vegfc-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

VEGF-C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Vegfc-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Vegfc-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen VEGF-C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Vegfc-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von VEGF-C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des VEGF-C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Vegfc-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.