Plasmide Double Nickase (m2) VE-cadherin: sc-419596-NIC-2
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m2) VE-cadherin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide VE-cadherin Double Nickase (m2) et le plasmide VE-cadherin Double Nickase (m22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Cdh5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VE-cadherin Antibody (F-8): sc-9989
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m2) VE-cadherin | sc-419596-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Cdh5 code la VE-cadhérine, une protéine des jonctions d’adhérence spécifique de l’endothélium qui assure une adhésion homophilique cellule–cellule afin de maintenir l’intégrité de la barrière vasculaire et la stabilité des vaisseaux. La VE-cadhérine se lie aux caténines et au cytosquelette d’actine pour coordonner le remodelage des jonctions au cours de l’angiogenèse et de la polarisation endothéliale, et elle s’interface avec les voies de signalisation VEGF/VEGFR2 et des GTPases de la famille Rho pour réguler la perméabilité et la transmigration leucocytaire. Une dérégulation de la fonction de Cdh5/VE-cadhérine est impliquée dans les fuites vasculaires pathologiques, la dysfonction endothéliale associée à l’inflammation et la néovascularisation aberrante observées dans les microenvironnements tumoraux et les rétinopathies. L’édition du gène Cdh5 chez la souris soutient des études mécanistiques en biologie endothéliale, notamment sur la dynamique des jonctions, les essais de bourgeonnement angiogénique et des modèles in vivo du développement vasculaire et de la rupture de la barrière.
VE-cadherin Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cdh5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cdh5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cdh5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cdh5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.