Plasmide CRISPR/Cas9 KO VDAC3 (m): sc-423663

Présentation

Vdac3 code le canal anionique voltage‑dépendant 3 (VDAC3), un pore en tonneau β situé dans la membrane externe mitochondriale, qui régule les échanges de métabolites et d’ions entre le cytosol et les mitochondries. En tant que membre de la famille VDAC, VDAC3 contribue au couplage de la phosphorylation oxydative, au maintien du potentiel de membrane mitochondriale et au contrôle redox‑sensible de l’homéostasie mitochondriale. Les processus associés à VDAC3 s’entrecroisent avec la signalisation de l’apoptose, la gestion des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et les voies de contrôle qualité des mitochondries qui modèlent les réponses cellulaires au stress. Des altérations de la fonction de VDAC3 ont été étudiées dans des contextes de dysfonctionnement mitochondrial, notamment des déséquilibres bioénergétiques et des défauts spécifiques à certains tissus, liés à des mécanismes de maladies métaboliques et neurodégénératives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VDAC3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vdac3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vdac3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vdac3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VDAC3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vdac3 pour l'étude de la signalisation de VDAC3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vdac3 essentiels à la fonction de VDAC3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vdac3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VDAC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VDAC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vdac3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VDAC3 plasmide HDR (m) et le VDAC3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vdac3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vdac3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.