VCX-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416596

Übersicht

VCX3B kodiert VCX‑C, ein Mitglied der VCX/Y‑Proteinfamilie, die in männlichen Keimbahngeweben angereichert ist und mit testisspezifischen Transkriptionsprogrammen in Verbindung steht. Proteine dieser Familie werden mit der Regulation der mRNA‑Verarbeitung und der posttranskriptionellen Kontrolle während der Spermatogenese in Zusammenhang gebracht, wodurch VCX‑C mit Prozessen wie RNA‑Metabolismus und Keimzelldifferenzierung verknüpft ist. VCX3B liegt in einer Region des X‑Chromosoms, die wiederholt von Kopienzahlvariationen betroffen ist, was es für Untersuchungen zur Dosissensitivität und Genomstabilität relevant macht. Eine Fehlregulation von Genen der VCX‑Familie wurde im Kontext männlicher Infertilitätsphänotypen und X‑chromosomaler genomischer Umlagerungen untersucht und stützt mechanistische Studien in Modellen der Reproduktions‑ und Entwicklungsbiologie.

Das VCX-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VCX3B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VCX3B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VCX3B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VCX-C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VCX3B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VCX-C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VCX3B-Exone abzielen, die für die VCX-C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VCX3B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VCX-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VCX-C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VCX3B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VCX-C HDR-Plasmid (h) und VCX-C HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VCX3B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VCX3B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.