VCX-C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416596-ACT

VCX3B kodiert VCX‑C, ein Mitglied der X‑chromosomal lokalisierten VCX/Y‑Genfamilie, die vorwiegend in männlichen Keimbahngeweben exprimiert wird und mit transkriptionsbezogenen Programmen der Spermatogenese in Verbindung gebracht wird. Obwohl seine genaue molekulare Funktion noch nicht vollständig geklärt ist, gilt VCX‑C als an chromatin- und RNA‑assoziierten Regulationsprozessen beteiligt, die die Genexpression während der Entwicklung von Keimzellen beeinflussen. Kopienzahlvariationen und eine fehlregulierte Expression von VCX‑Genloci auf dem X‑Chromosom wurden im Zusammenhang mit männlicher Infertilität sowie mit einer allgemeineren X‑chromosomalen genomischen Instabilität untersucht. Als Zielgen von VCX3B beim Menschen stellt VCX‑C einen nützlichen Ansatzpunkt dar, um Keimbahn‑Genregulation und die Biologie X‑chromosomaler Genfamilien zu untersuchen.

VCX-C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen VCX3B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

VCX-C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des VCX3B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der VCX3B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen VCX-C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native VCX3B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von VCX-C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des VCX-C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem VCX3B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.