Vav2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401490-ACT

Das humane Gen **VAV2** codiert **Vav2**, einen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor (GEF) der Rho-Familie, der den GDP–GTP-Austausch an **Rac1**, **RhoA** und **Cdc42** katalysiert und so den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, die Zelladhäsion und die gerichtete Migration koordiniert. Vav2 wirkt nachgeschaltet von Rezeptor-Tyrosinkinasen, Integrinen und Immunrezeptoren und verknüpft extrazelluläre Signale mit zytoskelettalen und transkriptionellen Programmen über Signalwege, die mit der **MAPK-** und **PI3K**-Signalübertragung verzahnt sind. Über diese Funktionen trägt Vav2 zur Regulation der Zellmorphologie, der Endozytose sowie signalabhängiger Veränderungen von Motilität und invasionsbezogenen Phänotypen bei. Eine dysregulierte **VAV2**-Expression oder -Signalgebung wurde mit aberranten Proliferations- und Migrationsprogrammen in der Krebsbiologie sowie mit veränderten Immun- und Gefäß-Signalkontexten in Verbindung gebracht, die für Krankheitsmechanismen relevant sind.

Vav2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen VAV2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Vav2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des VAV2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der VAV2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Vav2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native VAV2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Vav2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Vav2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem VAV2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.