VAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405997

Übersicht

VAT1 (Vesicle Amine Transport 1) kodiert ein konserviertes peripheres Membranprotein, das in neuronalen und sekretorischen Geweben angereichert ist, wo es mit synaptischen und Dense-Core-Vesikeln assoziiert. VAT1 wurde mit der Vesikelbiogenese und dem Vesikeltransport in Verbindung gebracht und unterstützt regulierte Exozytose- und Endozytoseprozesse, die die Freisetzung von Neurotransmittern und Hormonen prägen. Über diese Funktionen ist VAT1 mit Signalwegen verknüpft, die Membrandynamik, redoxassoziierte Proteininteraktionen und zelluläre Stressantworten in stark sekretorischen Zellen steuern. Eine veränderte VAT1-Expression wurde in Studien zu Neurodegeneration, krebsassoziierten Phänotypen und metabolischer Dysregulation berichtet, was VAT1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen vesikelabhängiger Signalübertragung macht.

Das VAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VAT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VAT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VAT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VAT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VAT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VAT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VAT1-Exone abzielen, die für die VAT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VAT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VAT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VAT1 HDR-Plasmid (h) und VAT1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VAT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VAT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.