VAP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401777

Übersicht

AOC3 kodiert das vaskuläre Adhäsionsprotein‑1 (VAP‑1), ein Oberflächenmolekül von Endothel- und glatten Muskelzellen, das sowohl als Adhäsionsrezeptor für Leukozyten als auch als kupferabhängige, semicarbazid‑sensitive Aminoxidase (SSAO) fungiert. Durch die oxidative Desaminierung primärer Amine erzeugt VAP‑1 Aldehyde, Ammoniak und Wasserstoffperoxid und verknüpft damit die vaskuläre Redoxbiologie mit der Regulation der Immunzellwanderung über das Endothel. Die VAP‑1‑Aktivität steht in Wechselwirkung mit entzündlichen Signalwegen, der Dynamik von Zell‑Zell‑Adhäsion und dem Umbau der extrazellulären Matrix innerhalb des vaskulären Mikromilieus. Eine fehlregulierte AOC3/VAP‑1‑Expression oder Enzymaktivität wurde mit chronisch entzündlichen Zuständen und vaskulärer Pathobiologie in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zur Endothelaktivierung und Leukozytenextravasation unterstützt.

Das VAP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AOC3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AOC3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AOC3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VAP-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AOC3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VAP-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AOC3-Exone abzielen, die für die VAP-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AOC3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VAP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VAP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AOC3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VAP-1 HDR-Plasmid (h) und VAP-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AOC3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AOC3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.