Plasmide Double Nickase (h) VAC14: sc-408584-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) VAC14 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide VAC14 Double Nickase (h) et le plasmide VAC14 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant VAC14. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VAC14 Antibody (C-10): sc-271831
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) VAC14 | sc-408584-NIC | 20 µg | $410.00 |
VAC14 code un composant d’échafaudage du complexe PIKfyve–FIG4–VAC14, qui régule le métabolisme des phosphoinositides, en particulier l’interconversion du PI(3)P et du PI(3,5)P2 sur les membranes endolysosomales. En contrôlant l’homéostasie du PI(3,5)P2, VAC14 soutient la maturation des endosomes, la fonction lysosomale, le flux autophagique et des événements de trafic membranaire qui maintiennent la protéostasie cellulaire. La perturbation de la signalisation dépendante de VAC14 altère la morphologie des vacuoles/lysosomes et les réponses au stress dans les neurones et d’autres types cellulaires, reliant cette voie aux phénotypes neurodégénératifs et neurodéveloppementaux rapportés lors de défauts de l’axe régulateur du PI(3,5)P2. Ainsi, VAC14 est largement étudié dans des modèles de dysfonctionnement endolysosomal, de maintien axonal et de réponses cellulaires au stress nutritionnel et osmotique.
VAC14 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VAC14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VAC14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VAC14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VAC14.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.