UXS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-413346-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UXS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UXS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und UXS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UXS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UXS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-413346-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UXS1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-413346-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane UXS1-Gen kodiert die UDP-Glucuronsäure-Decarboxylase 1, ein zytosolisches Enzym, das UDP-Glucuronsäure in UDP-Xylose umwandelt – einen essenziellen Zuckerdonor für die Biosynthese von Proteoglykanen und Glykosaminoglykanen. Durch die Bereitstellung von UDP-Xylose unterstützt UXS1 die Initiation und Elongation von Glycokonjugaten der extrazellulären Matrix und beeinflusst damit Zell–Matrix-Interaktionen, die Glycosylierungsprodukte des sekretorischen Wegs sowie die Gewebehomöostase. Störungen in diesem Nukleotidzucker-Stoffwechselweg können die Zusammensetzung von Proteoglykanen und die nachgeschalteten Signalumgebungen verändern, die Programme der Zelladhäsion, Migration und Differenzierung prägen. Eine Dysregulation von UXS1 ist daher für mechanistische Studien der Bindegewebsbiologie und für Erkrankungen relevant, die mit einer fehlerhaften Proteoglykanassemblierung zusammenhängen.
UXS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UXS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UXS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UXS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UXS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.