USP25 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424423-ACT

Das Mausgen *Usp25* kodiert die ubiquitinspezifische Peptidase 25 (USP25), ein deubiquitinierendes Enzym, das Ubiquitin-Ketten bearbeitet, um Protein-Stabilität, -Transport und die Beendigung von Signalprozessen zu modulieren. Die Aktivität von USP25 beeinflusst die Proteostase und inflammatorische Signalwege, einschließlich der Regulation von angeborenen Immunantworten, die mit NF-κB- und interferonassoziierten Signalwegen verknüpft sind, indem zentrale Signalkomponenten deubiquitiniert werden. In neuronalen und immunologischen Kontexten wurde die *Usp25*-Gen-Dosierung mit veränderter synaptischer und inflammatorischer Homöostase in Verbindung gebracht, was die Untersuchung seiner Rollen bei neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und Neuroinflammation unterstützt. Fehlregulierte Ubiquitin-Signalgebung unter Beteiligung von USP25 wurde zudem in Situationen proteotoxischen Stresses und tumorassoziierter Umprogrammierung von Signalnetzwerken untersucht, wodurch es für mechanistische Studien auf Signalweg-Ebene relevant ist.

USP25 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Usp25-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

USP25 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Usp25-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Usp25-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen USP25-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Usp25-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von USP25-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des USP25-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Usp25-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.