Plasmide Double Nickase (m) USP22: sc-432127-NIC

Le gène murin **Usp22** code **USP22**, une enzyme déubiquitinante au sein du complexe coactivateur transcriptionnel **SAGA**, qui retire l’ubiquitine de l’histone **H2B** et d’autres substrats afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et les programmes d’expression génique. En régulant l’initiation et l’élongation de la transcription, USP22 influence la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les voies associées à la différenciation. Une activité altérée de USP22 a été associée à des réseaux transcriptionnels et à une protéostasie dérégulés, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la signalisation oncogénique, des phénotypes de type « stem » et du contrôle épigénétique des gènes suppresseurs de tumeurs et des gènes de prolifération. Dans des modèles murins, la perturbation de **Usp22** est utilisée pour analyser comment le remodelage de la chromatine dépendant de l’ubiquitine façonne l’homéostasie tissulaire et des états transcriptionnels associés aux maladies.

USP22 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Usp22 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Usp22. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Usp22. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Usp22.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.