USP22 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432127

Descripción general

Usp22 codifica la enzima desubiquitinante USP22, un componente catalítico del complejo coactivador transcripcional SAGA que elimina la ubiquitina de la histona H2B y de otros sustratos para influir en la accesibilidad de la cromatina y en los programas de expresión génica. Mediante la regulación de la elongación transcripcional, la progresión del ciclo celular y las respuestas al daño en el ADN, USP22 ayuda a coordinar la proliferación, la diferenciación y el mantenimiento de la integridad del genoma. La actividad de USP22 se cruza con vías de control epigenético y con la proteostasis dependiente de ubiquitina, moldeando salidas de señalización específicas del contexto que con frecuencia se alteran en estados transcripcionales relevantes para el cáncer. Las firmas de expresión génica asociadas a USP22 y desreguladas se han vinculado con la agresividad tumoral y fenotipos tipo célula madre, lo que respalda su utilidad en estudios mecanísticos de la transcripción oncogénica y la plasticidad epigenética.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO USP22 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Usp22 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Usp22 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Usp22 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína USP22.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Usp22 para la investigación de la señalización de USP22, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Usp22 críticos para la función de USP22
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Usp22 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido USP22 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido USP22 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Usp22. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR USP22 (m) y el plásmido HDR USP22 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Usp22 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Usp22 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.