USP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424700

Übersicht

Usp2 kodiert die ubiquitinspezifische Peptidase 2 (USP2), ein deubiquitinierendes Enzym, das den ubiquitinabhängigen Proteinabbau rückgängig macht und damit die Proteostase sowie die Dauer von Signalübertragungen beeinflusst. Durch das Kürzen von Ubiquitinketten an ausgewählten Substraten moduliert USP2 Prozesse wie Zellzyklusprogression, Apoptose, DNA-Schadensantworten und inflammatorische Signalwege und steht zudem mit der Regulation metabolischer und zirkadianer Programme in Zusammenhang. Eine veränderte USP2-Aktivität wurde in experimentellen Modellen mit fehlreguliertem Wachstum und Phänotypen der Stressanpassung assoziiert, was USP2 zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um die Kontrolle der zellulären Homöostase durch das Ubiquitin-Proteasom-System zu untersuchen. In Mausmodellen wird die Perturbation von Usp2 häufig eingesetzt, um zu erforschen, wie Deubiquitinierung das Zusammenspiel von Signalwegen in Geweben und in immunrelevanten Kontexten feinabstimmt.

Das USP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Usp2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Usp2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Usp2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die USP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Usp2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der USP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Usp2-Exone abzielen, die für die USP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Usp2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom USP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom USP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Usp2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das USP2 HDR-Plasmid (m) und USP2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Usp2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Usp2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.